什么是质粒？ 质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA，是进行DNA重组的常用载体。 在分子生物学实验中，通常将目的基因插入到质粒的多克隆位点上，构建新的重组质粒，目的基因可以随质粒载体进入到受体细胞中。 获得高品质的质粒对下游实验起到非常重要的作用。 质粒提取的方法 质粒提取主要包括三个步骤：菌体扩繁、菌体裂解释放质粒DNA，和质粒DNA的分离与纯化。质粒提取办法中，最常用的是碱裂解法，它具有得率高，适用面广，快速，纯度高等特色。其原理是：强碱（pH12.0-12.6）环境下，SDS损坏细胞壁并裂解细胞，一同使宿主细胞的蛋白质、染色体及DNA发生变性，而质粒DNA因为其分子量小而缠结严密不易变性。pH调至中性时可恢复天然构象，在高盐条件下，细胞碎片、变性的蛋白质和染色体DNA发生沉积，离心后可去除。上清中的质粒DNA可经过乙醇沉积或许硅胶膜特异性吸附等方法，将质粒DNA从上清中回收。 常见问题剖析 Q: 未提出质粒或者质粒收获量很低 A、菌种老化 建议： 对于甘油保存的菌种，需要先进行活化。请涂布平板，或划线接种...