本试剂盒（BW-PD5004）适用于从10-50 mL菌液中快速、高效地提取100-500μg无内毒素的（内毒素水平≤0.1EU/μg）质粒DNA，可用于酶切、测序、转化、转染等下游应用。

BW-PD5004离子交换质粒小提试剂盒说明书（简易版）

问题1：得率低

原因1：离子交换柱未进行前处理，即未使用10倍数柱体积的灭菌水清洗

原因2：离子交换柱未使用BEQ Buffer平衡柱子，或因使用Buffer BEQ后未盖紧盖子导致其挥发影响溶液效果。

原因3：使用蠕动泵或者负压装置导致上清过柱太快，结合效率低。

原因4：洗脱液Buffer BEL使用量不充分，导致洗脱不完全。

原因5：离心法沉淀的离心力（14000rpm）、温度（4℃）、时间（30min）不够，导致未能充分沉淀。

原因6：操作过程中将质粒倒出。

问题2：内毒素含量高

原因1:样本量过多。处理样本量过多，等按照等比例增加其Buffer BWHⅠ的用量。

原因2：Buffer BWHⅠ加入量过少。如内毒素过高，可以增加Buffer BWHⅠ用量。

原因3：引入外源内毒素。操作过程中请使用无热源枪头与EP管。

原因4：样本培养时间过长。细菌的培养时间不要超过16 h，发生溶菌将降低质粒质量，最好控制在14小时，如培养时间过长，可以在原试剂盒用量上再增加 Buffer BWHⅠ量。

问题3：纯度低

原因1：裂解充分。样本量适中，裂解时间与混合时间充分

原因2：洗涤残留盐类和蛋白。醇沉淀后，使用70%乙醇洗涤时候，请进行充分的漂洗，管壁的部分请加入时候沿着管壁进行冲洗

原因3:乙醇挥发不彻底。在晾干过程中可放入烘箱中，或者通风橱晾干，保证乙醇全部挥发。

问题4：离子交换柱堵塞

原因1：再生不完全。离子交换柱如重复使用，再生建议过夜处理，加入1M氢氧化钠。

原因2：预处理将离子交换柱处理太干。柱预处理时候使用抽滤泵，导致柱子抽滤太干，下一步加入溶液时候很难流川，建议已处理如使用泵抽不要将柱子抽太干，保证其上表面依然有液体，同时加入溶液可以自行重力自滴。