BW-MGD6711.pdf

问题1：磁珠残留

原因1:手动提取时候吸磁珠步骤时间短或者仪器程序设置错误或者仪器与预装板不是配导致磁珠残留在洗脱液中，建议增加吸磁珠时间，或者将最后样本洗脱液进行12000rpm、4℃、离心3min。

问题2：纯度低

原因1：样本裂解不充分。样本与Proteinase K混合不充分，导致孵育处理样本裂解不完全，建议充分混匀。

原因2：盐类及蛋白污染。

洗涤时候程序设置力度太小，导致洗涤不充分，按说明书使用 wash Buffer洗涤两次并且程序设置按照说明书设置，尽量去除残留的离子；

裂解不充分，样本量过多，导致裂解不充分；

Proteinase K常温放置导致酶活力失活，建议放置在-20℃保存；

Proteinase K与加入到样本孵育温度过高，建议按照说明书操作，孵育温度为55℃。

原因3：乙醇残留

磁珠晾干过程太短，建议增加晾干时间室温晾干5min，机体晾干可以设置到90s。

原因4：血液样本中存在杂质

吸取样本时候如看到明显颗粒状杂质，建议去除，以免影响提取效果。

问题3：得率低

原因1：样本量太少。

提取样本量太少，建议增加样本量，或者提取全血样本浓度太稀，建议可以增加样本量。

原因2：洗脱不完全。

洗脱液温度低，建议按照说明书操作提取放置55℃水浴锅加热；

洗脱不完全，磁珠与样本混合不充分，导致磁珠未能完全结合基因组；

洗脱液体积少：洗脱温度设置太高，导致洗脱体积减少或者手动提取时候加入的洗脱液太少，导致洗脱得率低，建议按照说明书50-100ul洗脱。

原因3：混合不充分

手提过程中或者机体过程中混合不充分导致磁珠结合不完全。

问题4：跑电泳条带降解

建议跑电泳时在冰面上跑胶，可以避免RNA在跑电泳过程中因为温度太高降解。