BW-GD2211.pdf

BW-GD2211（英）

1）使用本试剂盒前，请仔细阅读说明书并遵守操作流程；
2）保存条件：Proteinase K可在室温下（15-25℃）储存一年，长期储存请分装并储存于-20℃;其他试剂及用品可保存于室温（15-25℃）。
3）如有疑问，欢迎致电400-115-2855。

问题1：柱子柱塞

原因1：柱子离心力太小，建议水平转子4000rpm离心2min或者角转子8000rpm离心1min

原因2：组织样本中有明显的有杂质污染。溶液中存在明显的颗粒物质，可于10,000rpm离心3 min去除未消化的物质。

原因3：组织样本预处理时候不够破碎，导致加入柱子量太多导致堵住情况，建议预处理时将柱子研磨破碎有利于裂解与上柱。

原因4:样本量过多：处理样本量过多，说明书是处理30mg样本，请按照说明书操作。

问题2：纯度低

原因1:样本裂解不充分

样本与Proteinase K混合不从分，导致孵育处理样本裂解不完全，或者与Buffer BL混合不充分导致裂解不充分，建议加入时震荡2min；

样本量过多，说明书样本量为30mg，如增加样本量请等比例增加Proteinase K以及Buffer BL用量；

样本预处理不够破碎，导致样本很难被Proteinase K破壁。

原因2：盐类及蛋白污染

盐类污染，省略了DNA wash Buffer 洗涤吸附柱或者只洗涤了一次。按说明书使用DNA wash Buffer洗涤两次，尽量去除残留的离子；

蛋白污染，样本量过多，未增加Buffer KB洗涤量，如增加样本量或者样本杂志过多，建议在原说明书步骤中再增加一次Buffer KB洗涤。

原因3:乙醇残留

没有进行空管离心操作，或者空离的离心力太小，建议如离心力太小可以增加离心时间或者使用50℃烘箱烘干2min。请按照说明书进行空管离心操作。

原因4：洗脱时离心转速太大

柱子上的膜可能由于离心速度太大存在于洗脱液中，避免转速高于15,000 ×g，不会干扰PCR或限制酶消化。

原因5：血红蛋白留在柱子上

样品上柱后，用2 mL Buffer BL洗涤一次。

问题3：得率低

原因1：样本量太少

提取样本量太少，建议增加样本量。

原因2：裂解不充分

样本量过多，导致裂解不充分；

Proteinase K常温放置导致酶活力失活，建议放置在-20℃保存；

Proteinase K与加入到样本孵育温度过高，建议按照说明书操作，孵育温度为55℃。

原因3：洗脱不完全

洗脱液温度低，建议按照说明书操作提取放置55℃水浴锅加热；

洗脱不完全，建议可以进行二次洗脱，就是第一次洗脱完后，再将洗脱下来的样本再加入到柱子里面进行二次洗脱；

洗脱液体积少：洗脱液体积小导致润柱子不完全，导致洗脱得率低，建议按照说明书50-100ul洗脱。

原因4L：加入Buffer BL后没有加入无水乙醇。

建议加入Buffer BL后按照说明书加入对应的无水乙醇或者异丙醇

原因5：DNA Wash Buffer内没有加入无水乙醇

DNA Wash Buffer为母液，需要按照瓶装对应加入等量的无水乙醇。