ViraTrap™ 逆转录病毒小量纯化试剂盒(V1172)

ViraTrap™ Retrovirus Purification Miniprep Kit

货号 规格 目录价
BW-V1172-00 2 T 851.00
BW-V1172-01 10 T 4192.00
BW-V1172-02 20 T 7374.00
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ViraTrap™ 逆转录病毒小量纯化试剂盒能从逆转录病毒感染的细胞培养液中快速、高效地分离纯化逆转录病毒。 传统的逆转录病毒纯化是利用CsCl超速离心法从细胞蛋白和培养基成分中纯化得到重组病毒,但这种方法耗时较长,处理的样品量有限,且有细胞残片、膜碎片和多余的蛋白质残留。 

本试剂盒可以在2小时内完成病毒纯化,相比于传统CsCl超速离心的逆转录病毒纯化方式(需要24个小时才能完成纯化),本系列试剂盒操作简单,可快速、高效地从逆转录病毒感染的细胞培养液中分离纯化逆转录病毒。纯化到的病毒颗粒可直接用于下游实验,如细胞和动物感染。
产品特点:

1)操作简单,快速,可以在1个小时内完成病毒纯化,不依赖于超速离心操作;

2)纯化效率高:小量纯化可从1-2个T75瓶培养的细胞培养液中纯化病毒颗粒,回收率在50%-70%;

3)每个纯化柱,可以重复利用一次,用于纯化相同种类的逆转录病毒。

Q:怀疑纯化所得病毒上清液中含有质粒,换液后觉得没有去除干净,上清液已用0.45 μm过滤器过滤
怀疑依据:
① PCR扩增,以样品为模板,电泳有条带;
②用RNA提取试剂盒提取样品中的RNA,没做RT,能扩增出目的条带;
③ DNase消化病毒样品前后,用qPCR检测,发现消化前Ct值在12,消化后Ct值在32。
由此得出质粒并没有去除干净的结论,对吗?

A:我们的RV Mini Column不吸附质粒DNA。关于检测的3种方法:
第一,PCR在变性步骤时,已整合到病毒基因组上的片段会因为加热病毒破裂释放出来;
第二,逆转录病毒一般是RNA病毒,多具有逆转录酶,所以即使没有人为的反转录步骤,自行反转录;
建议:第7步,最后一步,将样品加入至Centrifugal Filter,3,000 rpm,4℃离心10 min,剩余500 μL,加入PBS3.5 mL,3,000 rpm在4℃离心10 min。可以用PBS洗涤2-3遍,病毒不会损耗,但有利于去除核酸片段。

1)使用本试剂盒前,请仔细阅读说明书并遵守操作流程;
2)保存条件:LV Maxi Columns、Buffer S、Buffer MS储存于4℃,其它组分储存于室温(15-25℃);
3)如有疑问,欢迎致电400-115-2855。