Q:一个批次的病毒,收集细胞后冻融3次,取上清感染,GFP表达效果挺好,纯化后滴度很低,10的2次方,qPCR,50个循环,标曲稀释200倍,没有扩增曲线。3个10 cm皿的细胞原液都上柱了,移液器来回吹打8次。
A:1. 是否粘稠?导致粘稠的原因:核酸片段多,影响病毒吸附,最终导致病毒回收差;
2. 处理前,荧光显微镜下观察GFP所占百分比,细胞状态好的话,GFP会在细胞内;
3. 核酸酶处理后,样品保留5 μL-10 μL;
4.洗脱后的4 mL液体,测OD280的值,可以粗略的估算病毒的含量。