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常见问题
本试剂盒适用于从多种酵母细胞(< 3mL)中分离纯化总RNA。加入溶壁酶破碎酵母细胞壁,结合独特的缓冲液系统和吸附柱吸附,可以纯化到高质量的RNA。纯化到的RNA无蛋白质、基因组DNA污染,可直接用于后续分子生物学操作,如RT-PCR,Northern杂交等。
产品特点:
1)针对酵母独特配置,操作更简单、流程更优化,30分钟内完成提取;
2)安全可靠,提取过程无需酚氯仿抽提;
3)RNA纯度高,无杂质残留,特别适合于对纯度要求很高的下游实验。
问题1:得率低
原因1:样本中RNA已经降解,建议采集样品后快速液氮冷冻并储存于-70℃,防止样本中RNA降解,或者使用新鲜的样本。
原因2:样本不新鲜或者样本过量导致裂解不充分,建议减少处理样本的加入量。
原因3:RNA wash Buffer 中未加入等比例乙醇,建议按照试剂盒说明书要求加入等比例的无水乙醇。
原因4:样本预处理不充分,建议请充分破碎样本
问题2:纯度差
原因1:蛋白质污染,建议可增加BufferRB再一次洗涤
原因2:盐类污染,建议增加 RNA wash Buffer 洗涤次数;如后端提取RNA有盐类污染,可加入2.5倍体积的乙醇和0.1M的NaCl(终浓度)来沉降RNA,-20℃孵育30min,4℃,10,000×g离心15min,用DEPCtreatedddH2O重悬RNA沉淀。
问题3:基因组污染
原因1:RT-PCR加入过量RNA,建议减少RT-PCR反应时,RNA加入过量,RNA加入量应控制在50-100ng。
原因2:样本富含DNA。减少样品初始使用量。