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常见问题
本试剂盒可用于从革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌中分离纯化总RNA。 通过溶菌酶消化细胞,结合独特的缓冲液系统,利用膜吸附原理,可以纯化到高质量的总RNA。纯化到的RNA无基因组污染,完整性好,稳定性高。纯化到的总RNA可直接用于后续分子实验操作,如RT-PCR、northern杂交等。
产品特点:
1)针对细菌独特配置,操作更简单、流程更优化,30分钟内完成RNA提取;
2)安全可靠,整个过程无需酚氯仿抽提;
3)收获量高,完整和稳定性好,可直接用于后续分子实验操作。
*使用提示:
为取得好的实验效果,请按照以下方法进行菌液制备:挑取新鲜单菌落接种至合适培养基中,过夜初摇12~16小时,按照1:50的比例接种初摇培养液至新鲜培养基中进行再次摇菌,至OD600等于0.6~1.0,吸取不超过3 mL菌液(< 5 x10^8)进行RNA提取;
问题1:得率低
原因1:样本中RNA已经降解,建议采集样品后快速液氮冷冻并储存于-70℃,防止样本中RNA降解,或者使用新鲜的样本。
原因2:样本不新鲜或者样本过量导致裂解不充分,建议减少处理样本的加入量。
原因3:RNA wash Buffer 中未加入等比例乙醇,建议按照试剂盒说明书要求加入等比例的无水乙醇。
原因4:样本预处理不充分,建议请充分破碎样本
问题2:纯度差
原因1:蛋白质污染,建议可增加BufferRB再一次洗涤
原因2:盐类污染,建议增加 RNA wash Buffer 洗涤次数;如后端提取RNA有盐类污染,可加入2.5倍体积的乙醇和0.1M的NaCl(终浓度)来沉降RNA,-20℃孵育30min,4℃,10,000×g离心15min,用DEPCtreatedddH2O重悬RNA沉淀。
问题3:基因组污染
原因1:RT-PCR加入过量RNA,建议减少RT-PCR反应时,RNA加入过量,RNA加入量应控制在50-100ng。
原因2:样本富含DNA。减少样品初始使用量。