针对多糖多酚复杂样本植物的RNA提取试剂盒,利用基因组DNA清除柱技术可以有效清除gDNA残留,得到的RNA一般不需要DNase消化,可用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。
产品原理:
独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除,然后裂解混合物用乙醇调节RNA结合吸附到基因组DNA清除柱,基因组DNA清除柱子同时吸附清除残留的DNA, 然后RNA被选择性洗脱滤过。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅胶膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除, 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点:
1)完全不使用有毒的苯酚,氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤;
2)简捷,单个样品操作一般可在25分钟内完成,世界上最简单快速的试剂盒;
3)特殊的植物RNA助提剂可以有效结合多糖多酚,提高清除效果;
4)基因组DNA清除柱技术可以有效清除gDNA残留,得到的RNA一般不需要DNase消化,可用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验;
5)适应性极其广泛,可以提取包括棉花、葡萄叶片、等多种国内外试剂盒提取失败的样品;
6)多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.9~2.2,基本无DNA残留,可用于RT-PCR,Northern-blot和各种实验。
产品应用:
该试剂盒的适用性较广,可提取洋葱、大豆、芜菁、紫菜、黄鹤菜、番茄、水稻、荞麦、拟南芥、棉花、木瓜、柑橘、葡萄、桃子、苹果、樱桃、石斛、青杄、茶梅、牡丹、东南景天、海棠、玉兰、雪莲、油松、白杨、菊花、玫瑰花、栀子、亚洲百合、山苍子、五倍子、葛根、人参、丹参、油桐、毛泡桐、油茶、海藻、松针等100多种样品。
问题1:得率低
原因1:样本中RNA已经降解,建议采集样品后快速液氮冷冻并储存于-70℃,防止样本中RNA降解,或者使用新鲜的样本。
原因2:样本不新鲜或者样本过量导致裂解不充分,建议减少组织样品的加入量。
原因3:RNA wash Buffer 中未加入等比例乙醇,建议按照试剂盒说明书要求加入等比例的无水乙醇。
原因4:植物样本预处理不充分,建议请充分破碎植物样本
问题2:纯度差
原因1:蛋白质污染,建议可增加BufferRB再一次洗涤
原因2:盐类污染,建议如后端提取RNA有盐类污染,可加入2.5倍体积的乙醇和0.1M的NaCl(终浓度)来沉降RNA,-20℃孵育30min,4℃,10,000×g离心15min,用DEPCtreatedddH2O重悬RNA沉淀。
问题3:基因组污染
原因1:RT-PCR加入过量RNA,建议减少RT-PCR反应时,RNA加入过量量,RNA加入量应控制在50-100ng。
原因2:样本富含DNA。减少样品初始使用量。
问题4:柱子堵塞
原因1:样本量太多或者离心力不够。建议样本请使用震荡器震荡混匀;离心过程中可以增加离心时间,但离心转速不变;减少起始样本量