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常见问题
本试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统,有效去除植物组织中多糖和酚类复合物,可从100 mg植物组织中快速提取总RNA。
所得RNA无蛋白质和其他杂质污染、纯度高、稳定性好,可直接用于RT-PCR, Northern杂交等分子生物学实验。
应用Biomiga生产的植物RNA提取试剂盒已经成功提取:
棉花、海棠、黑加仑、烟草、拟南芥、虎杖、大豆、草莓、冬青、月季、蔷薇、沙棘、冬枣、芦荟、报春花、水稻、玉米、唐菖蒲、樱桃、白玉兰、毛白杨、樱花、葡萄、百合花、紫菜、绿藻、香蕉、水仙花、地被菊、苹果、梅花、番茄、石斛、毛桃、苎麻、慈姑、葛根、甘肃桃、玫瑰花、槟榔果、甜糖菊等样品。
产品特点:
1)RNA纯度高,无杂质残留,特别适合于对纯度要求很高的下游实验;
2)针对植物材料独特配置,操作更简单、流程更优化;
3)安全可靠,无需酚氯仿抽提;
4)操作简单,可在30分钟内完成RNA提取。问题1:得率低
原因1:样本中RNA已经降解,建议采集样品后快速液氮冷冻并储存于-70℃,防止样本中RNA降解,或者使用新鲜的样本。
原因2:样本不新鲜或者样本过量导致裂解不充分,建议减少组织样品的加入量。
原因3:RNA wash Buffer 中未加入等比例乙醇,建议按照试剂盒说明书要求加入等比例的无水乙醇。
原因4:植物样本预处理不充分,建议请充分破碎植物样本
问题2:纯度差
原因1:蛋白质污染,建议可增加BufferRB再一次洗涤
原因2:盐类污染,建议如后端提取RNA有盐类污染,可加入2.5倍体积的乙醇和0.1M的NaCl(终浓度)来沉降RNA,-20℃孵育30min,4℃,10,000×g离心15min,用DEPCtreatedddH2O重悬RNA沉淀。
问题3:基因组污染
原因1:RT-PCR加入过量RNA,建议减少RT-PCR反应时,RNA加入过量量,RNA加入量应控制在50-100ng。
原因2:样本富含DNA。减少样品初始使用量。