问题1：得率低

原因1：样本中RNA已经降解，建议采集样品后快速液氮冷冻并储存于-70℃，防止样本中RNA降解，或者使用新鲜的样本。

原因2：样本不新鲜或者样本过量导致裂解不充分，建议减少血液/血浆/血清样品的加入量。

原因3：RNA wash Buffer 中未加入等比例乙醇，建议按照试剂盒说明书要求加入等比例的无水乙醇。

问题2：纯度差

原因1：蛋白质污染，建议可增加BufferRB再一次洗涤

原因2：盐类污染，建议如后端提取RNA有盐类污染，可加入2.5倍体积的乙醇和0.1M的NaCl（终浓度）来沉降RNA，-20℃孵育30min，4℃，10,000×g离心15min，用DEPCtreatedddH2O重悬RNA沉淀。

问题3：基因组污染

原因1：RT-PCR加入过量RNA，建议减少RT-PCR反应时，RNA加入过量量，RNA加入量应控制在50-100ng。

原因2：样本富含DNA。减少样品初始使用量，或者增加buffer的使用量，分批次多上几次RNA柱子。

问题4：柱子堵塞

原因1：样本量太多或者离心力不够。建议样本请使用震荡器震荡混匀；离心过程中可以增加离心时间，但离心转速不变；减少起始样本量