无内毒素质粒小量提取试剂盒(PD1212)
EZgene™ EndoFree Plasmid Miniprep Kit
货号 | 规格 | 目录价 |
BW-PD1212-01 | 50 T | 368.00 |
BW-PD1212-02 | 250 T | 1564.00 |
本试剂盒采用专利DNA结合系统,Mini Column高效吸附DNA,同时蛋白质和其他杂质通过漂洗液去除。核酸最终通过无菌水或者Elution Buffer洗脱。
传统方法分离的质粒通常含有高水平的内毒素(脂多糖),对于内毒素敏感细胞系转染或显微注射,应先清除内毒素。该系统使用一种特殊配方的缓冲液,可从质粒DNA中提取内毒素。两轮提取可将内毒素水平降低至0.1 EU每 1 μg质粒DNA。 本试剂盒为传统纯化工艺提供了一种高效的内毒素去除步骤,可用于制备转染级质粒DNA。
本试剂盒适用于从3-12 mL大肠杆菌培养液中提取质粒,提供的Mini Column可结合至多80 μg质粒DNA。
纯化得到的无内毒素质粒可用于下游应用,例如内毒素敏感细胞系、原代培养细胞的转染或显微注射。
1)使用本试剂盒前,请仔细阅读说明书并遵守操作流程;
2)保存条件:RNase A储存于室温(15~25℃),Buffer A1加入RNase A 后储存于4℃,其它组分储存于室温(15~25℃);
3) 如有疑问,欢迎致电400-115-2855。
问题1:内毒素高
原因1:加入 Buffer C1时候未中和完全。加入后要充分混匀,内部无明显的局部阴影,并且过滤离心的上清无蛋白沉淀残留。
原因2:样本量过多。处理过量菌液,应该按照比例增加Buffer RET的用量。
原因3:Buffer RET未充分混匀。加入Buffer RET 后应充分混匀,可增加上下颠倒次数至15次。
问题2:Endoclean Buffer 过于粘稠不好取样
原因1:为去除内毒素效果较好,再吸取该溶液时请轻轻使用移液枪进行吸取溶液,当溶液充满整个枪头时候再取出枪头。
问题3:离心后不能将Endoclean Buffer与上清液分离
原因1:离心温度不可低于23℃,离心时候请设置离心机稳定。
问题4:内毒素含量超标
原因1:上清中残留Endoclean Buffer。在萃取完后,吸取上清时候请勿吸取Endoclean Buffer。
原因2:Endoclean Buffer与上清液未充分混合。请充分混合,混合完成后混合液呈现出粉色浑浊状态。
原因3:Endoclean Buffer冰浴时间过短。建议放置冰中孵育10min以上。