质粒小量提取试剂盒II(PD1213)
EZgene™ Plasmid Miniprep Kit II
| 货号 | 规格 | 目录价 |
| BW-PD1213-01 | 50 T | 190.00 |
| BW-PD1213-02 | 100 T | 380.00 |
| BW-PD1213-03 | 250 T | 950.00 |
| 问题 | 可能原因 | 建议 |
| 得率低 | 裂解不完全 |
加入Buffer B1后充分混匀 |
| 如果瓶盖没拧紧，重配Buffer B1( 0.2 M NaOH和1% SDS) | ||
| 菌液过度培养或不新鲜 | 菌液培养12-16 h为佳，若当天来不及纯化，将菌液离心后收集菌体保存于-20℃。请勿将菌液置于 4℃过夜 | |
| 质粒拷贝数低 | 增加培养基和Buffer A1,B1,N1的体积 | |
| 没有DNA | 质粒在宿主菌内丢失 | 准备新鲜的菌液 |
| 基因组污染 | 加入Buffer B1后超过5 min | 加入Buffer B1后不要剧烈震荡，孵育时间不要超过5 min |
| RNA污染 | RNase A 没有加入至Buffer A1 | 在Buffer A1 中加入RNase A |
| 质粒跑出点样孔 | 乙醇没去干净 | 洗脱前确保没有乙醇残留. 如果必要的话，可再次离心 |
1）使用本试剂盒前，请仔细阅读说明书并遵守操作流程；
2）保存条件：RNase A储存于室温（15~25℃），Buffer A1加入RNase A 后储存于4℃，其它组分储存于室温（15~25℃）；
3) 如有疑问，欢迎致电400-115-2855。
问题1：质粒提取得率低
原因1：样本拷贝数低。不同质粒载体因拷贝数差异会造成产量有明显的波动。对于低拷贝质粒应加大菌液使用量，同时按照比例增加Buffer A1、Buffer B1和Buffer C1的用量。洗脱液使用前先放置65℃预热，以增加洗脱效率。低拷贝质粒例如：pET系列，pWE15，SuperCos，pBR322，pACYC及其衍生载体，pSC101及其衍生载体等。
原因2：样本拷贝数低。不同质粒载体因拷贝数差异会造成产量有明显的波动。对于低拷贝质粒应加大菌液使Buffer B1溶液温度低于15℃时，会有晶体析出，使用前需要放置37℃水浴锅加热溶 解，呈现澄清透亮状态方可使用。
原因3：裂解时间过短，裂解不充分。加入裂解液后，需要一定的时间进行裂解，一般时间控制再5min以内，当样本从浑浊样变成澄清，说明裂解完全。
原因4：培养过程质粒丢失。甘油菌菌种保存过程中存在质粒丢失现象，建议培养细菌前先划线或涂布平板活化菌种，以稳定产量。
原因5：培养时间过长，抗生素失效。细菌的培养时间不要超过16 h，发生溶菌将降低质粒质量，最好控制在14小时。
原因6：宿主菌株差异性。不同宿主对质粒产量也会产生影响。建议使用end A-大肠杆菌菌株，如DH5α、TOP10及XL10等
问题2：RNA污染
原因1：RNAase失活或者活力下降。已加入RNase A的Buffer A1长时间室温放置可能会出现酶活下降，使用后应及时放回4℃冰箱。
原因2：样本量过多，超过RNAase处理量。由于菌体数量过多，导致Buffer A1中RNase A不足以消化菌体中的RNA，建议等比例增加Buffer A1用量或者减少菌液量。
原因3：醇类加入过多。加入无水乙醇时请严格按照说明书操作，异丙醇加入实际上清体积的0.3倍。
问题3：基因组污染
原因1：裂解力度过大。解时建议轻轻反转，避免裂解过度导致质粒与基因组断裂。
原因2：中和力度过大。中和时不可使用振荡器震荡，因轻柔反转，中和后状态呈现豆花状，即中和完全。
原因3：因样本片段<2000KB，容易产生基因组。中和过程中可以增加冰浴，降低基因组污染
问题4：纯度低
原因1：盐类残留。用DNA wash Buffer再漂洗1次；建议沿吸附柱管壁四周加入，或加入后颠倒混匀2-3次，有助于减少盐离子残留。
原因2：乙醇残留。空转过后，可以室温方式5min，让其醇类挥发。
原因3：蛋白污染。未使用去蛋白试剂清洗，建议使用去蛋白试剂Buffer KB进行洗涤；
样本量过多，当样本量增加时候，请等比例放大去Buffer KB。
