【秘籍】RNA提不好？这些技巧快收好
作为一名繁忙的研究僧，
每天泡在实验室，
不是做实验就是看文献，
实验若是进展不顺利，
发表SCI论文遥遥无期，
心都凉了半截…
小倍走遍天下，为各位忙碌在实验台前的大侠搜集全国各地能人异士的妙招，总结以下几点：
基因组污染在RNA条带上方有细细的DNA条带，单一且亮
◆减少起始组织样品的量可避免基因组污染；也可增加裂解液用量。
◆脾脏、胸腺等组织中的核酸含量较高，可进行多次酚氯仿抽提，去除多余的DNA；也可在得到的RNA溶液加入RNase-Free的DNase Ⅰ处理，处理后得到的RNA可直接用于下游实验。
RNA条带呈现小条带量多，大条带量少，主带不清晰
●一定要将裂解液覆盖住细胞、组织。
●新鲜组织富含内源性核酸酶（如肝脏、胸腺等），需要液氮将组织研磨碎，且匀浆时使用更多裂解液。
●尽量选择新鲜的样品，幼嫩新鲜的材料RNA完整且含量高，衰老或病害等受损的材料中RNA降解较为严重。样品取材后应立即置于液氮中速冻，然后再转移至-80℃冰箱中保存。样品决不能未经液氮速冻而直接保存于-80℃冰箱中。材料不宜长期保存，且避免反复冻融。冷冻样品，即使是冷冻细胞，如果不在液氮下研磨，而直接加入裂解液匀浆，RNA也比新鲜样品更容易降解。样品在与裂解液充分接触前决不能出现融化，所以研磨用具必须预冷，在碾磨过程中要及时补充液氮。样品研碎后，在液氮刚刚挥发完时，将样品迅速转移到含裂解液的容器中，立即混匀匀浆。
●减少样品处理量，样品处理一定要快速。
●提取所用的玻璃器皿可通过高温灭活（160℃，4 h）去除RNase。RNA样品接触的所有塑料制品（tips、电泳槽、移液器）等，都需DEPC或NaOH处理来去除RNase后才可使用。人的皮肤、汗液、呼出的气体含有大量RNase，操作人员需要经常更换一次性手套，穿戴实验服。
得率低或没有提取成功
☆减少样品处理量，增加裂解液使用量，增加匀浆和裂解时间。
不同组织和细胞中RNA的丰度不同，如肝脏、胰腺、心脏等富含RNA（2-4 μg/mg），脑、胚胎、肾脏、肺、胸腺、卵巢等是中丰度组织（0.05-2 μg/mg），膀胱、骨、脂肪等是低丰度组织（< 0.05 μg/mg）。根据样品提取RNA的难易程度决定初始样品处理量。
☆对于RNA含量较低的纤维组织（肌肉组织或纤维素较高的植物组织）可适当提高起始材料的用量；蛋白和脂肪含量较高的材料，可用氯仿对上清再次抽提。
☆收集细胞时，请注意尽量去除培养液。
☆样品处理：
a植物、真菌：液氮研磨，加入裂解液后快速匀浆；
b动物组织：匀浆or液氮研磨，加热，加入蛋白酶K（例如肝脏组织）裂解；
c革兰氏阳性菌、阴性菌：溶菌酶；
d酵母：玻璃珠+溶壁酶；
RNA检测的方法主要还是电泳法：一般情况下，使用1%-3%的琼脂糖凝胶电泳，可看到完整的28S和18S条带。如果不是EB染料，建议不要使用2%以下的琼脂糖凝胶常规电泳，可能导致条带分不开；亦可使用变性电泳（MOPS Buffer），只有在变性条件下，RNA分子完全伸展，其电泳率才与分子量成正比。
【RNA升级】更美的价格，配上更好的产品
【有奖征集】发文章，赢奖励金计划
杭州倍沃医学科技有限公司自主研发的样本保存液、各类基因组DNA/cf-DNA、病毒 DNA/RNA等自动化（磁珠法）或手工（柱式法）提取试剂盒性能优异，其中十余项产品获体外诊断试剂备案。无内毒素质粒提取试剂盒及NGS测序建库片段筛选试剂等与国际知名品牌性能相当。同时倍沃医学也是全球少数几家能够生产病毒（慢病毒、腺病毒、腺相关病毒等）纯化试剂盒的厂家。全自动核酸提取仪 BW Express 16可同时对1到16个血液、组织、拭子或其他类型临床样本的 DNA、RNA 或蛋白质的全自动化提取与纯化。
公司奉行“真诚、善意，精致、完美”的管理理念，努力打造“为企 业创造价值，为员工打造平台，为客户提供优品”的企业文化，积极努力地推进各项工作。
