一个批次的病毒,收集细胞后冻融3次,取上清感染,GFP表达效果挺好,纯化后滴度很低,10的2次方,qPCR,50个循环,标曲稀释200倍,没有扩增曲线。3个10cm皿的细胞原液都上柱了,移液器来回吹打8次?
1. 是否粘稠?导致粘稠的原因:核酸片段多,影响病毒吸附,最终导致病毒回收差;2. 处理前,荧光显微镜下观察GFP所占百分比,细胞状态好的话,GFP会在细胞内;3. 核酸酶处理后,样品保留5 uL-10 uL; 4.洗脱后的4 mL液体,测OD280的值,可以粗略的估算病毒的含量。
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水网藻含有多糖、脂类、大量代谢产物,推荐使用GD2621.
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20-40kb,一般20kb,最多不超过40 kb。
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前者适用细菌基因组纯化试剂盒GD2411,后者适用真菌gDNA纯化试剂盒GD2416。
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不能,主要用在大肠杆菌,即革兰氏阴性菌。